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浅析玉米种子纯度检测方法及鉴定程序

品种纯度检验是玉米新品种保护及种子生产的的技术依据,品种真实性和纯度是保证良种遗传特性充分发挥的前提,是正确评定种子质量的重要指标。品种纯度的高低对于农业产品的质量和品质的都有较大影响。近年来,农业部、省站、市站都高度重视对种子纯度的抽查、检验。因为生产经营假劣种子影响很大,不但会造成减产、同时也影响企业声誉。因此品种纯度检验在种子生产、加工、储藏及经营贸易中.具有重要意义和应用价值。本文综述玉米杂交种纯度鉴定的一些方法与程序,这些方法经多年试验证明准确率高.可操作性强。 一、 种子的形态鉴定 随机从送检样品中数取400粒种子,设4个重复,每个重复不超过lOO粒种子,并参照其品种标准样品或图片和有关资料。依据下列特征逐粒进行鉴定分析。 1.粒型。不同品种的种籽粒型不一样,一般可分为马齿型、半马齿型、硬粒型。 2.籽粒的大小色泽。不同品种种子的籽粒颜色不一样.有白色、黄色、红色、紫色.同一个品种的种子.其籽粒的大小及色泽是一致的;一般情况下,籽粒过大或过小、色泽过深或过浅多数为异品种种子;籽粒上棱角的有无及明显程度等也是籽粒鉴别特征。 3.种胚。种胚的大小、形状及其凹陷程度,胚部褶皱的有无、多少。 4.籽粒顶部的颜色、形状。有些品种种子的顶部呈白色或黄白色,而有的则无色或不明显.顶部的颜色由于存在种子的直感现象且反应敏感,应作为最重要的判断依据;籽粒顶部形状呈长方形、圆形:不同品种顶部粉质多少也不一样;种粒上花丝脱落痕迹的位置及其明显程度也是鉴别依据。 5.种粒的质地。不同品种种子的质地不一样,一般可分为粉质和硬质(呈半透明状)。 6.种脐的颜色。同一品种的种脐和穗轴的顶色是相同的,这是一个受遗传因子所控制的稳定形状,一般可分为白色和粉色。鉴定结果后.将本品种的种子分开,数出以异品种粒数按下列公式计算品种纯度:品种纯度(%)=(供检种籽粒数一异品种粒数),供检种籽粒数lOO。在掌握籽粒外部形态鉴定方法的同时应掌握主要玉米品种亲本的特征特性,加强练习.以区分杂交种与自交系。更重要的是与电泳测定、种植鉴定相联系.以利于及时修正,加强自己的鉴别能力。 二、幼苗鉴定法 随机从送样样品中数取100粒种子,可设2个重复,并数取标准样品种子及其亲本自交系品种原种种子100粒.在同一适宜条件下进行培养室播种、发芽,并湿度适宜:可将温度控制在(25~2)℃,加强光照,保持水分适宜。 1.播种7天后(2叶l心期),可根据下列性状进行逐株鉴定:幼苗的大小,一般自交苗没有杂交优势,幼苗弱小.杂交种的幼苗粗壮;第一片叶的的颜色,有的品种自交苗的第一片叶有退绿斑,以此来区别杂交种和自交苗的区别。 2.播种14天后(5叶1心期),可根据下列性状进行逐株鉴定:芽鞘的颜色及颜色的分布情况:幼苗的长相.凡不具本品种株型特征者均属异品种:叶子的颜色、宽窄及叶子的扭曲情况;叶鞘的颜色及叶脉的明显程度。鉴定结果后,将本品种的植株区分开,并数出异品种株数,然后计算品种纯度。用幼苗鉴定种子纯度也应与田间种植鉴定相结合,找出两者的相关性,以便结果更准确.可靠。 三、凝胶电泳法 电泳是指溶液中的带电粒子在电场中移动的现象。这一现象在l9世纪就已被发现,直到1937年开发了蛋’白质电泳技术,并成功地分离了血清蛋白质之后,得到广泛应用。电泳的种类很多,目前我们普遍采用的就是盐溶蛋白电泳法。 1.原理。从玉米种子中提取的盐溶蛋白在聚丙烯酰胺凝胶的浓缩效应、分子筛效应和电泳分离的电荷效应作用下进行分离,通过染色显示蛋白质谱带类型。不同玉米品种由于遗传组成的不同,种子内所含的蛋白质种类有差异.这种差异可利用电泳图谱加以鉴别.从而对种子真实性和品种纯度进行鉴定。 2.仪器设备及试剂 (1)仪器设备:电泳仪(5oowsv连续可调、O--400mA连续可调、额定输出功率2oow)、垂直板夹心式电泳槽、单籽粒粉碎器、天平(感量0.0l克、0.001克、0.0001克各一台1、酸度计、磁力搅拌器、高速离心机(5000秒/分钟以上1、电冰箱、电炉、离心管(1.5毫升)、离心管架、移液管(10毫升、5毫升、2毫升各两支)、微量进样器f5~IO0~L)、恒温箱、观片灯等。 (2)试剂。丙烯酰胺、N.N 一亚甲基双丙烯酰胺、乳酸、乳酸钠、甘氨酸、抗坏血酸、硫酸亚铁、氯化钠、蔗糖、甲基绿、三氯乙酸、过氧化氢、考马斯亮蓝R250、无水乙醇、正丁醇等f所用试剂均为分析纯,所用水均为去离子水)。 3.溶液配制 (1)电极缓冲液。称取甘氨酸6.00克,倒人2000毫升烧 杯中.加入18o0毫升去离子水溶解,用2.0毫升乳酸调pH3.3.再加去离子水定容至2Oo0毫升,混匀。 (2)样品提取液。称取氯化钠5.80克,蔗糖200.00克,甲基绿0.15克.倒人1000毫升烧杯中,加去离子水800毫升溶解.加热至微沸,放至窒温,再用去离子水定容至1000毫升.在4~C条件下保存。 (3)分离胶缓冲液。取1.43毫升乳酸钠于1000毫升烧杯中.加去离子水980毫升.用乳酸调至pH3.0,再加去离子水定容至1000毫升,贮于棕色瓶中,在4℃条件下保存。 (4)分离胶溶液。称取丙烯酰胺l12.50克,N,N 亚甲基双丙烯酰胺3.75克.抗坏血酸0.25克,硫酸亚铁8.0毫克,用分离胶缓冲液溶解.再用分离胶缓冲液定容至1000毫升,过滤于棕色瓶中,在4~C条件下保存(不超过14天)。 (5)浓缩胶缓冲液。取O.30毫升乳酸钠于200毫升烧杯中。加去离子水9o毫升,用乳酸调至pH5.2,再加去离子水定容至100毫升,贮于棕色瓶中4℃条件下保存。 (6)浓缩胶溶液。称取丙烯酰胺6.o0克,N,N,_亚甲基双丙烯酰胺1.00克.抗坏血酸0.03克,硫酸亚铁O.8毫克,用浓缩胶缓冲液溶解,再用浓缩胶缓冲液定容至100毫升,过滤于棕色瓶中,在4℃条件下保存(不超过6天)。 (7)3%的过氧化氢溶液。取30%的过氧化氢1毫升,加9毫升去离子水,贮于棕色瓶中,在4~C条件下保存。 (8)染色液。称取考马斯亮蓝R250 2.00克,在研钵中用100毫升无水乙醇研磨溶解,过滤于棕色瓶中。取l0毫升该溶液。加入到200毫升的IO%(W/y)Z氯乙酸溶液中,混匀。

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